两年一度的湖北省自然科学优秀论文评审工作年前结束，在众多高水平的参评论文中，武汉病毒所毕利军等发表在“Anal. Chem.”上的论文“MutS蛋白介导的基因突变检测蛋白质芯片”经过初评、答辩、复评等程序，最终获得特等奖、方明刚发表在“Journal of General Virology”上的论文“中国棉铃虫单核衣壳多角体病毒的开放阅读框94编码一种新型保守的包膜衍生的病毒粒子蛋白，ODV－EC43”获得一等奖。
MutS蛋白是大肠杆菌DNA错配修复系统的重要点识别成分，它能够单独识别并与之结合。该论文阐述了利用MutS蛋白对错配或未配对碱基的结合活性，发展了高通量、快速筛选基因突变的蛋白质芯片方法。根据DNA错配修复MutS蛋白结构与功能上的高度保守性，通过PCR从E.coli K-12基因组中扩增出DNA错配修复基因mutS。通过基因水平的分子操纵，将连接肽、Strep-tagII、连接肽和MutS蛋白的编码序列依次连接在原核表达载体pET32a上，构建了融合蛋白Trx-His6-Linker peptide-Strep-tagII-Linker peptide-MutS的表达载体，并在大肠杆菌AD494中进行IPTG诱导表达。THLSLM中的Trx和His6亲和肽可以增加蛋白的可溶性及便于纯化。连接肽的加入增大了融合蛋白各个成分之间的距离，减少空间位阻，使各个蛋白能够较大程度地保持其原有的生物活性。SDS-PAGE分析表明有一与预期分子量相应的诱导表达条带，其表达量占菌体蛋白的30%左右，且以可溶形式存在。利用固定化金属离子配体亲和层析柱纯化目的蛋白，其纯度可达90%。融合蛋白THLSLM的生物活性鉴定结果表明：它既能识别、结合含有错配碱基的DNA双链，又保留了与Streptavidin特异结合的生物活性。通过融合蛋白THLSLM中Strep-tagII与Streptavidin的特异结合作用将THLSLM定向布阵沉积在芯片基质上制作蛋白质芯片。该蛋白质芯片能够很好地检测含有各种错配类型和含有1-4个未配对碱基的寡核苷酸片段，并成功用于不同长度结核杆菌rpoB基因片段中单个碱基错配的检测。该方法借用了生物系统本身的高保真的遗传变异修复机制，检测基因突变的特异性优于传统的DNA杂交法，而且操作简单，加之采用生物芯片的高通量数据生产特性，能够发展成为批量检测基因突变的新的模式方法，具有广泛的应用前景。
中国棉铃虫核多角体病毒的开放阅读框94（Ha94）是一个长度为1086bp，具有同Autographa californica 多核衣壳多角体病毒开放阅读框109序列高度同源的基因。在目前已被测定基因组全序列的所有杆状病毒中该基因是高度保守的，因此认为它是杆状病毒中的一种核心基因。在被中国棉铃虫单核衣壳对交替病毒感染后24小时到96小时，能在被感染的HzAM1细胞内检测到Ha94的转录本。由融合蛋白GST－Ha94诱导产生的多克隆抗体能特异地识别被HaSNPV感染后36到96小时的HzAm1细胞裂解液中一个43kDa的蛋白质－HA94,这表明Ha94是一个晚期基因。对出芽病毒和包涵体病毒（ODV）来源的蛋白质成分进行Western blot 分析结果表明HA94编码包涵体病毒中的一个结构成分。当包涵体病毒被进一步分解成核衣壳和囊膜成分进行Western blot 分析时，结果表明HA94基因编码一种同核衣壳和囊膜有关的结构蛋白。综上所述，Ha94基因编码一种新的HaSNP中的ODV特异的结构蛋白，该蛋白被命名为ODV-EC43。
病毒所 梁莉
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